1506年7月，英格蘭國王亨利七世緻信教皇尤裡烏斯二世，表達了對意大利局勢的關切，并表示願意配合教皇的行動，為其提供資助并承諾不會在沒有得到教皇允許的情況下進攻法國，作為拉攏盟友的代價，亨利七世也提出了一點小要求，其中一條是提名英格蘭駐教廷使節克裡斯托弗·班布裡奇為樞機主教，這不算難以接受，教皇同意了。

除此之外，馬克西米利安一世的女兒，前阿斯圖裡亞斯親王妃和前薩伏伊公爵夫人奧地利的瑪格麗特開始在意大利活動，宣揚威尼斯的威脅并以她的個人魅力拉攏支持者，對此感到威脅的威尼斯曾經試圖通過向教皇歸還部分市鎮以尋求和解，尤裡烏斯二世慨然笑納，但并沒有做出緩解威尼斯焦慮的實質舉動。

見此困境，威尼斯曾經試圖向英格蘭求助，但亨利七世再度重申了支持教皇的立場，這令尤裡烏斯二世感到滿意，他批準了克裡斯托弗·班布裡奇的樞機主教任命。8月，尤裡烏斯二世正式對威尼斯頒布集體絕罰令，宣稱“若不使你們成為原本那樣的卑賤漁民，我絕不會罷休”，對此，威尼斯使節的回應是“神父，若您不自檢點，我們能更容易讓您成為一個小小的教士”，但行動上，他們仍積極備戰，他們清楚此次的危機不同以往。

1507年2月，路易十二正式率軍南下，于次月強渡阿達河，在阿尼亞德洛地區大敗威尼斯，一掃昔年狼狽撤離那不勒斯時的頹勢，同時馬克西米利安一世也率領帝國軍隊進駐曾被威尼斯侵吞的布雷西亞，威尼斯一時四面楚歌。而就在這個時候，馬克西米利安一世的兒子，胡安娜女王的丈夫，卡斯蒂利亞國王兼勃艮第公爵腓力一世，在一次宴會後突發腸道疾病而死，死神的利爪平等地掐在每一個他想要帶走的靈魂的脖頸上，他身為國王與公爵也沒有什麼不同。

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國王已經去世，而女王不肯讓國王下葬，她甚至不相信國王已死。

她守在他的病床邊，親眼看着他在哀嚎中停止呼吸，他那美麗強健的軀體很快也會變得蒼白僵硬，而她的靈魂似乎也被抽走了。她閉門不出，不理會正急迫地希望她出面主持大局的卡斯蒂利亞人，而腓力一世去世後王國裡甚至沒有一位能夠幫助她決策的近親。在這樣的局面下，深受伊莎貝拉女王信任的托萊多大主教西斯内羅斯不得不為王國的未來打算了。

他再次回想起女王的遺囑，深刻共情了女王的憂慮，并自認為了解了女王的用意：女人不能統治國家，哪怕是伊莎貝拉女王的女兒，或許女王的英明也是依賴丈夫的緣故，正因為深刻認識到了這一點，女王才會賦予丈夫在女兒被證實無力統治國家時攝政的權利，他畢竟是女王的父親，他總比那群佛蘭德斯人好，想起腓力一世那群侍從他便感到一陣頭痛。

雖然斐迪南二世違背誓言再婚，但他畢竟還沒有生下兒子，即便生下兒子，胡安娜女王也有女兒或孫女可以與之聯姻，伊莎貝拉女王的血脈總是可以在卡斯蒂利亞和阿拉貢的王座上流傳下去的。

當踞守那不勒斯的斐迪南二世收到托萊多大主教的信後，他終于露出滿意的笑容：如果他執意留在卡斯蒂利亞争奪攝政權，那他再娶的事實會被反複提及，由此更無奪取攝政權的資本，倒不如讓胡安娜和腓力在卡斯蒂利亞胡作非為，如他所料，胡安娜果然會把一切都搞砸的。

當伊莎貝拉最信任的忠臣都開始不相信胡安娜的統治能力後，他也到了可以回歸卡斯蒂利亞的時候了。“胡安娜。”回到卡斯蒂利亞後，他立刻去見他的女兒，胡安娜女王披着黑紗，腹部已經高高隆起，她已經懷孕八個月了，看到父親，她先是一陣茫然，而後立刻激動地跪在父親腳下抓住他的衣擺，“啊，父親，我很想念您......”