上周，給周老師跑了一次western blot，結果是：目的條帶不清晰，出現雜帶，樣品中似乎有雜質導緻條帶背景很髒。

周老師把需要重跑的樣品截圖發我，道：“我是真的建議你先想想問題在哪再動手，一味地重複隻不過是浪費時間、浪費樣品。”

于是我跟她解釋道：“可能是膠和膜的問題。膠是上周配的，用電泳液浸泡，一半被電泳液浸泡，一半沒泡着。還有，膜可能途中幹過，導緻背景很髒。這幾天幫鵑姐跑的樣品避免了這兩個問題，條帶跑得還好。我再試試吧。”

“必須保證系統穩定可靠。這是勝任工作最最最基本的要求啦。”

起初她認為我未經思考，一味重複。我跟她說自己思考了原因，也在實踐中得到了驗證。她又開始說：要保持穩定。我不知該說啥。

我向她提議：要不要把上樣量從15ul每孔改成10ul每孔。内參都連到一塊了。

“你知不知道實驗目的是什麼？你知道你要關注的目的條帶是哪個嗎？”

我又苦笑一番，過去說“隻要知道實驗的一些參數就行了，問那麼多幹什麼”的是你，如今說“你知不知道實驗目的是什麼”也是你，這樣的老闆，真的不值與共。

規避那兩個因素後，跑出的條帶，仍舊不堪入目。我把解決辦法和可能原因列了出來：一，上樣之前再次變性、離心；二，用純水稀釋的loading buffer提蛋白，可能沒能使蛋白充分裂解，導緻背景髒。

這一分析遭到了周老師強烈反駁：“你配過loading buffer嗎？

“你知道RIPA和loading buffer裡面的成分嗎？”

我到網上比較了下，兩者成分大緻不差，隻是RIPA裡多了脫氧膽酸鈉和NaCl，便回道：好像有些不同。